梯度PCR做梯度测试时的操作方法

梯度PCR做梯度测试时的操作方法,另外PCR有条带,但是条带很模糊,请教高手
08-12-05  巧克力冰冰 发布
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    silviaflower

    很简单,你去引物合成公司合成引物回来之后,会有一张引物单子,上面会写着两条引物的Tm值,取两个值中低的那个Tm值减3度即为PCR的退火温度,如果这个退火温度做PCR电泳检测有非特异扩增或者无条带,你就需要做一系列的退火温度梯度了。打个比方,如果Tm值为58.2跟59.6,你就先用55度退火,如果实验结果不佳,你就可以做50,52,54,56,58的退火梯度。如果PCR仪先进的话,可以设置一系列退火梯度,一次性PCR就能完成。如果比较旧的那种仪器,你就需要一次一次做了。你可以到我的百度空间看看

    08-12-05 | 添加评论 | 打赏

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